c7c7.app第一醫院劉立新團隊在肝纖維化形成及其機制方面取得進展
肝纖維化是一種常見的病理狀態，其發病機制主要是多種病因引起肝臟發生損傷，多種炎性細胞因子如轉化生長因子β1（Transforming growth factor beta 1,TGFβ1）等分泌增多，從而導致肝星狀細胞（Hepatic stellate cells，HSCs）活化，細胞外基質（Extracellular matrix，ECM）合成增多，最終形成肝纖維化。肝纖維化是可逆的，如果得不到很好的控制，將導致不可逆的肝硬化，乃至肝癌。HSCs活化是肝纖維化發生發展的中心環節。在正常的肝臟中，HSCs主要位于肝臟Disse間隙，處于靜止狀態。當肝臟發生損傷時，靜止的HSCs被激活并轉變為肌成纖維細胞?；罨腍SCs遷移至組織受損部位并逐漸積累，不僅產生大量的ECM，而且可以防止ECM被降解。因此抑制HSCs活化被認為是抑制肝纖維化的有效策略。越來越多的研究表明，自噬可以促進HSCs活化，同時自噬也可以為活化的HSCs提供能量以促使其存活。自噬的調控是復雜的，其中PI3K/AKT/mTOR信號通路是調節細胞自噬的主要通路。長鏈非編碼RNA H19被發現參與了自噬體的延伸/閉合，對自噬有促進作用，具體機制可能與PI3K/AKT/mTOR信號通路有關。
胰島素樣生長因子結合蛋白相關蛋白1（Insulin-like growth factor binding protein-associated protein 1，IGFBPrP1）是導師課題組十余年來研究發現的一種新的致肝纖維化因子。前期一系列研究表明，IGFBPrP1能夠活化HSCs，產生過多的ECM，促進肝纖維化的發生發展。另外，IGFBPrP1和TGFβ1可以相互調節，共同促進HSCs活化。TGFβ1是已知的最強的致肝纖維化因子，可通過自噬激活HSCs，PI3K/AKT信號通路參與了其對自噬的調控。TGFβ1也能促進H19的表達，其機制可能與PI3K/AKT的活化有關。鑒于TGFβ1與H19和自噬有關，而IGFBPrP1與TGFβ1可互為因果，因此本研究以長鏈非編碼RNA H19和自噬作為切入點，研究H19是否通過自噬調控IGFBPrP1致肝纖維化形成的作用及其機制。
在這項研究中，研究團隊首先建立膽總管結扎（Bile duct ligation,BDL）誘導的小鼠肝纖維化模型，確定肝纖維化形成過程中IGFBPrP1與H19、自噬的表達變化。結果顯示IGFBPrP1與H19、自噬呈伴隨性增高。接著研究團隊分別將腺病毒介導的IGFBPrP1（AdIGFBPrP1）在體內通過小鼠尾靜脈注射轉染C57BL/6小鼠肝組織，同時在體外轉染JS-1（小鼠肝星狀細胞株），通過qRT-PCR、Western blotting、免疫組織化學、透射電子顯微鏡等分子生物學實驗證實，IGFBPrP1激發了自噬的表達。為了明確自噬對IGFBPrP1誘導的HSCs活化及肝纖維化形成的調控作用，分別在體內和體外給予自噬抑制劑LY294002和自噬誘導劑雷帕霉素干預，實驗觀察到減少自噬可以抑制IGFBPrP1誘導的HSCs活化，ECM生成減少，肝纖維化減弱；增加自噬可以促進IGFBPrP1誘導的HSCs活化，ECM生成增多，肝纖維化加重。由于LY294002又是PI3K抑制劑，雷帕霉素是mTOR抑制劑，研究團隊同時證實PI3K/AKT/mTOR信號通路參與了IGFBPrP1對自噬的調控。另外，通過qRT-PCR、原位雜交等發現IGFBPrP1也促進了H19的表達，給予LY294002和雷帕霉素后發現IGFBPrP1可通過PI3K/AKT/mTOR信號通路促進H19的表達。最后，研究團隊在AdIGFBPrP1轉染JS-1的基礎上，將H19上調或下調，發現H19可促進IGFBPrP1誘導的HSCs自噬及活化，給予LY294002和雷帕霉素后發現PI3K/AKT/mTOR參與了其中的調控。最后得出的分子調節機制是IGFBPrP1通過PI3K/AKT/mTOR和H19的相互調控促進HSCs自噬及活化，進而促進肝纖維化形成。
圖1小鼠尾靜脈注射腺病毒
圖2分子調控機制圖
該研究由c7c7.app第一醫院科研中心實驗室劉立新教授團隊完成，劉立新教授為該論文的通信作者；c7c7.app2016級博士研究生黃婷娟為該論文的第一作者。
該論文以題為“IGFBPrP1 accelerates autophagy and activation of hepatic stellate cells via mutual regulation between H19 and PI3K/AKT/mTOR pathway”發表在Biomedicine & Pharmacotherapy（IF:3.457）雜志上。
