鄧志華課題組報道異體肝星狀細胞誘導擴增Treg細胞治療自身免疫性肝炎小鼠的實驗研究
近日，c7c7.app第二臨床醫學院鄧志華課題組在Biochemical and Biophysical Research Communications在線發表了題為“Adoptive transfer of regulatory T cells stimulated by Allogeneic Hepatic Stellate Cells mitigates liver injury in mice with concanavalin A-induced autoimmune hepatitis”的研究論文。
自身免疫性肝炎（Autoimmune hepatitis，AIH）是一種免疫介導的肝。⒉』粕婕耙糯、環境等因素，最終肝臟免疫耐受被打破，引起肝臟自身免疫反應，出現肝臟炎癥壞死，并可進展為肝纖維化、肝硬化。自20世紀50年代首次應用潑尼松（聯合應用或不聯合硫唑嘌呤）治療以來，這一標準療法已保持數十年不變，但停藥后病情極易復發甚至惡化。因此，研究新的治療策略控制AIH進展具有重要臨床意義。
AIH患者體內的調節性T細胞（Regulatory T cells, Treg）數量減少、功能缺陷，在疾病活躍期更為明顯。Treg細胞是重要的免疫調節細胞，可以特異性抑制活化T細胞，且該抑制作用無MHC限制性，FoxP3是Treg細胞分化和發育的關鍵基因，有理由認為過繼轉移Treg細胞治療AIH是替代或協同糖皮質激素及免疫抑制劑的有效方法，如何有效擴增Treg細胞并在體內發揮免疫調節功能，是目前研究的重點和難點。
鄧志華課題組查閱大量文獻資料，發現肝星狀細胞（HSC）在肝纖維化中發揮關鍵作用，此外近年研究還發現HSC具有免疫細胞特征，直接參與肝臟的免疫調控，但由于HSC是肝臟的非實質細胞，數量極少，分離小鼠原代HSC非常困難，限制了其研究進展。課題組經過不斷摸索研究，運用OptiPrep分離液結合原位手工灌注法分離到BALB/c小鼠高純度高得率的原代HSC，倒置熒光顯微鏡下觀察：新分離的HSC呈圓形，具有豐富的脂滴，在328nm波長的紫外光激發下自發藍綠色熒光，逐漸從圓形變為梭形或星形，培養7d后，伸出細長的偽足。原代HSC油紅O染色陽性，胞漿中的脂滴呈紅色，細胞核呈藍色，傳2代后免疫細胞化學染色HSC完全表達α-SMA和Desmin，自發活化。課題組進一步將BALB/c來源的HSC與C57BL/6小鼠脾臟來源的Treg細胞共培養，觀察HSC對Treg的誘導作用，異體活化的HSC可在體外呈劑量依賴性、通過細胞-細胞直接接觸方式誘導Treg增殖，擴增的Treg可有效表達FoxP3，在體外可有效抑制Teff細胞增殖。為進一步證實擴增的Treg的免疫調節活性，將擴增的Treg通過尾靜脈注射到ConA誘導的AIH小鼠體內，觀察其對AIH小鼠受損肝臟的影響，發現擴增的Treg可調節AIH小鼠脾臟Treg/Th17比例失衡，肝臟炎癥和肝細胞壞死明顯減輕[圖2]，血清ALT、AST水平IL-6、TNFα、IFN-γ水平降低，發揮了良好的治療作用。該課題為尋找替代糖皮質激素/硫唑嘌呤治療AIH的免疫細胞療法提供了可靠的實驗研究結果。
圖1分離的原代肝星狀細胞倒置熒光顯微鏡下自發藍綠色熒光（A）和油紅染色（B）圖片
圖2過繼轉移體外擴增的Treg細胞后AIH模型小鼠肝臟病理變化（A：正常肝臟B：AIH模型肝臟C：過繼轉移Treg后肝臟）
上述工作主要由c7c7.app第二臨床醫學院鄧志華課題組的博士研究生黃會芳（單位：c7c7.app第一醫院消化科）完成，鄧志華為通訊作者。
